从动物mRNA制品申报监管风向看mRNA质量分析
政策信号已释放：mRNA质量不再只是“研发指标”
近年来，随着mRNA疫苗和体内基因治疗技术在传染病和肿瘤治疗领域的加速推进，IND项目越来越多，国内外监管体系也在快速跟进。而近期发布的《动物mRNA制品注册申报技术资料要求（征求意见稿）》，也释放出一个非常明确的信号：mRNA产品的质量控制高要求，已经延伸到了动物生物制品领域，尤其在以下几个维度上，监管关注明显提升：
结构完整性（Integrity）
Cap & Poly(A)质量属性
杂质残留（dsRNA / DNA / 酶）
工艺相关杂质可追溯性
方法学的定量能力与一致性
mRNA质量分析的核心逻辑：从“结构”到“杂质”的全维度覆盖
结构质量：mRNA是否完整？
关键问题：
是否存在截短（truncation）？
是否发生降解？
是否包含非预期结构？
直接影响：表达效率 & 稳定性
功能修饰：Cap & Poly(A)是否“加对了”？
监管关注点：
Cap加帽率（尤其Cap1）
Poly(A)长度及均一性
直接影响：翻译效率 / 免疫原性 / 半衰期
杂质控制：“带进来”了什么？
重点杂质包括：
dsRNA（免疫刺激核心来源）
DNA模板残留
酶残留（T7、DNase、RNase等）
小分子副产物
直接影响：安全性 + 免疫副反应 + 注册风险
工艺一致性：批次是否“稳定”？
核心问题：
不同批次是否一致？
分析方法是否可放大？
是否满足注册放行标准？
这一步是研发到IND/注册的分水岭。
解决方案：
构建一套“可申报”的mRNA质量分析体系
针对上述几个方面，近岸蛋白综合多年来原料及工艺进化经验，提供经方法学验证的质量分析方案及试剂。其中，mRNA加帽率检测通过了中国合格评定国家认可委员会（CNAS）评审认定，并发放认可决定书。
相关试剂产品
dsRNA ELISA Kit
目录号：RD017
为满足mRNA疫苗企业的原液检测需求，近岸蛋白推出dsRNA ELISA Kit，可配套检测mRNA原液中dsRNA的含量情况，解决原液质检问题。本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）检测dsRNA, 可以高灵敏、特异性地检测和定量分析mRNA中的dsRNA残留量。
产品特点
检测时间缩短至1.5小时。
检测线性范围：0.047-3 ng/ml。
T7 RNA聚合酶残留检测试剂盒(T7 RNA Polymerase ELISA Kit）
目录号：PA102/PA106
在mRNA疫苗药物的生产过程中，T7 RNA聚合酶作为整个反应体系的核心酶，根据规定，需要对其进行残留检测，本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法（ELISA）检测T7 RNA聚合酶，可以高灵敏度、高特异性地检测和定量分析mRNA原液中的T7 RNA聚合酶残留。
产品特点
检测线性范围：0.256 ng/ml
加帽率检测样品处理完整试剂盒(mRNA Capping Detection Sample Preparation Kit )
经典磁珠法样品处理流程：
产品特点
一步完成探针结合与酶切，操作简便快速，全流程仅需1.5-2小时
特殊的裂解探针设计思路有效减少次裂解产物形成，便于后续加帽率检测结果分析
酶切mix稳定性强，37℃ 21天，反复冻融150次，酶切活性无影响
同时，在方法学的探索中，近岸蛋白永不止步，开发出创新快速加帽率样品处理试剂盒（目录号：CD002），并提交了发明专利申请（申请号：202311212061X）。在该方法中，无需生物素化探针，沉淀液替代磁珠，更低成本完成加帽率检测样品处理。探针与目标mRNA退火形成DNA/RNA杂交双链后，引导RNase H在特定位置切割mRNA。再利用特殊优化配制的沉淀液可有效回收5’端酶切片段，操作简便快速，处理后的样本可直接用于LC-MS系统下的加帽率检测。
创新快速样品处理流程：
产品特点
一步完成探针结合与酶切，操作简便快速，全流程仅需1.5小时
无需生物素化探针和磁珠，成本更低
回收率大于80%
酶切mix稳定性强，37℃ 21天，反复冻融150次，酶切活性无影响
mRNA加尾率检测伴侣——核糖核酸酶T1(RNase T1)
目录号：E151
核糖核酸酶T1（RNase T1）是通过一系列纯化步骤分离得到的重组蛋白，是一种核糖核酸内切酶。该酶在鸟苷残基位点后特异性地切割单链RNA，产生3’磷酸末端。该酶通过形成核苷2’，3’-环磷酸中间体来切割3’-鸟苷残基与邻近核苷5’-OH基团之间的磷酸二酯键。反应产物是3’-GMP末端寡核苷酸。利用RNase T1核酸酶作用于鸟嘌呤核苷酸（G）3'端磷酸，切割相邻核苷酸之间的磷酸二酯键，特异性地切割单链RNA，释放Poly(A)序列。使用oligo-dT 磁珠对样品进行纯化，纯化后的样品可进行液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）检测，检测可分析其长度与组成。
RNase检测试剂盒(RNase Detection Kit)
目录号：DT007
核糖核酸酶（Ribonuclease, RNase）在自然界中广泛存在，即使是微量的RNase也会污染常见的分子生物学试剂，尤其会影响涉及RNA的相关实验。因此，需要一种RNase残留检测试剂，可测试任何与RNA相关的溶液中是否有RNase残留。
RNase Detection Kit提供一种方便且灵敏的荧光检测方法，可用于检测蛋白、核酸、试剂溶液等样品中有无RNase。本试剂盒可同时检测包括 RNase A、RNase T1、RNase I、微球菌核酸酶、S1 核酸酶、绿豆核酸酶、Benzonase 全能核酸酶和RNase R在内的多种RNase。
RNase Substrate是一种新型的RNase A底物，该底物一端标记有荧光基团，另一端标记有淬灭基团，淬灭基团的物理距离会将荧光基团发出的荧光抑制到极低水平。通过短波紫外线照射或在荧光计中检测，含有RNase污染的溶液会在检测中产生绿色荧光，而没有RNase的溶液不会发出荧光。
紫外条件下，可以明显区分阴性和阳性。
mRNA进入质量驱动时代
如果说过去几年，mRNA行业的关键词是： “表达” & “递送”，那么接下来，行业真正的竞争核心将变成： “质量控制能力”，尤其是在动物疫苗和体内治疗领域，监管正在快速向人药标准靠拢。
谁先建立完整、合规、可申报的QC体系，谁就更快进入临床与商业化。
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